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博物馆导游泰德（威尔·法瑞尔 配音）热爱自己的工作，其博学热忱的讲解博得了带学生来此参观的漂亮女教师麦琪（德鲁·巴里摩尔 配音）。老馆长却宣布了一个不幸的消息：由于参观的人数太少，博物馆面临着关张的窘境，唯一的拯救办法就是推出一项其他博物馆前所未见的新奇展品。老馆长出示给泰德一本带有地图的神秘日记，表明非洲扎格瓦部落迷失的一处圣陵所在，只要从中带回一尊大型神像，博物馆就有救了。泰德乘着轮船向非洲出发，到了丛林后找到了地图所示的古老神像，但完全不像老馆长描述的那样宏伟。而此刻一只顽皮的小猴对泰德发生了兴趣，
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由于在纽约自然历史博物馆担任警卫有出色表现，拉瑞（本·斯蒂勒BeStiller饰）出任某家电小公司的CEO，而且还在电视上接受了著名脱口秀主持人的访谈，儿子对他仰慕，爱情如影随形，一派春风得意的样子。不过，好景不长，当他故地重游，却意外发现馆长已经因为更新展览并准备把过时的展品挪到华盛顿的史密森博物馆继续展出。这让拉瑞感到有些气愤，他觉得自己有责任重振博物馆之雄风，于是他决定留下来再做一晚警卫，以唤起那些老朋友的共同努力。事实上，在搞定了罗斯福（罗宾·威廉斯RobiWilliams饰）、林肯、拿破仑、伊凡
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天海博物馆仓库管理员大刚憨厚老实，相貌平平，一直暗恋同馆清纯大方，楚楚动人的大美女、博物馆研究员李冰荷。尽管有李冰荷的孪生弟弟李宇凡作为坚强后盾，大刚事先准备好的五花八门表白方式仍然一个也没用上，反而被中途杀出的一个不速之客、古董商人韩正平抢占了先机。但这个多金而又帅气的贵公子的真实身份竟是专偷古董的大盗，他接近冰荷的目的是为了盗取珍贵的唐朝文物唐俑！宇凡和冰荷在抢夺唐俑的过程中遭遇车祸，均昏迷过去……宇凡在睡梦中看到武则天要被太宗李世民治罪的惊险一幕，惊醒之后又见到姐姐虽未清醒但却有了明显的感知体征。在
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麦克斯是一名优秀的记者，在新闻圈子内享有盛名，不过在一次空难事件中他的报道没有现场感不再被上司重用。有一次他被派往一座博物馆作一次无关紧要的采访，但在这里他却正好赶上了一起劫持人质事件，而劫持人质的萨姆却是一个十分值得同情的人。他是一个本分的美国人，在麦克斯采访的这家博物馆作保安，他工作努力，在家里是一个好丈夫，也是两个孩子的好父亲，但他却被老板解雇了。在与老板论理时他一怒之下竟枪杀了以前要好的同事，并劫持了人质。麦克斯现场采访了萨姆，在了解这些情况后他决定帮助萨姆逃走，当他说服萨姆走出博物馆时，等待萨姆
